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ESR1和ESR2在卵巢癌细胞中的差异化调控机制及潜在治疗靶点研究

申报人：平荟煜 申报日期：2025-03-26

基本情况

2025创新项目
ESR1和ESR2在卵巢癌细胞中的差异化调控机制及潜在治疗靶点研究 学生申报
创新训练项目
医学
基础医学类
学生来源于教师科研项目选题
二年期
卵巢癌是全球范围内较为常见的妇科癌症，恶性程度高、复发率高且预后差，严重威胁着女性的生理和心理健康。研究表明雌激素及其受体表达失衡能够影响卵巢癌细胞的增殖迁移，但其具体作用机制尚不清楚。本项目前期发现，雌激素可以显著促进雌激素受体1（ESR1）高表达的卵巢癌细胞系SKOV3的增殖和迁移过程，而对雌激素受体2（ESR2）高表达的COAV3细胞无明显促进作用。基于此，项目后续将系统探究雌激素通过ESR1和ESR2对卵巢癌细胞生长的影响；结合RNA-seq和体内外实验，进一步确定雌激素影响细胞系SKOV3和COAV3增殖迁移的关键信号通路，并深入阐明ESR1和ESR2在调控卵巢癌发展中的内在作用机制。本研究的实施将为卵巢癌的发病机制提供理论基础，同时为卵巢癌的精准诊断和预后改善提供重要理论指导。
1.自2023年3月以来跟随指导教师在学校公共科研平台学习并进行卵巢发育及相关疾病的实验研究，对该领域的相关研究有了深刻的了解。熟练掌握细胞培养、免疫荧光染色、免疫组化、HE染色、小鼠饲养及生殖相关手术操作等实验技术；
2.以第四参与人的身份参与2023年大学生创新训练项目“人卵巢颗粒细胞通过能量依赖性内吞过程对卵泡液EVs不同亚型的摄取研究”；
3.2024年参加山东省大学生医养健康创新创业大赛，获省级三等奖；
4.2024年参加第八届大学生基础医学创新实验大赛，获校级二等奖。
孟凯老师：
1.山东省自然科学基金青年项目，ZR2020QH042, WT1基因及其可变剪切体调控多囊卵巢颗粒细胞分化的作用机制研究，2021/01-2023/12,15 万，在研，主持；
2.贺林院士新医学临床转化工作站科研基金面上项目，JYHL2021MS13，雌激素受体ESR1与ESR2在卵巢癌生长中的作用机制研究，2022/01-2024/12，10万，在研，主持；济宁医学院教师科研扶持基金，JYFC2019KJ010，WT1基因调控PCOS大鼠卵泡颗粒细胞分化的研究，2020/01-2022/12,3万元，已结题，主持；
3.国家自然科学基金面上项目，31873033，牛卵母细胞玻璃化冷冻导致基因组DNA甲基化降低的调控机理，2019/01-2022/12，59万元，已结题，参加。
王晓梅老师：
1.2023-2025年主持山东省自然科学基金青年项目，“WT1基因可变剪接 WT1(+/-KTS)在卵巢上皮细胞恶性转化中的作用及机制研究”（ZR2022QC188）；
2.2022-2024年主持贺林院士新医学临床转化工作站科研基金项目“WT1基因对不同卵巢癌细胞系生物学行为的影响及分子机制研究”（JYHL2021MS10）；
3.2022-2025 年参加国家自然科学基金委员会面上项目“牛供核细胞过表达 miR-101促进牛克隆胚胎重编程机制研究（32172936）。
1.对本项目提出合理的方案和分析，使项目可行性更强；
2.对本项目提供平台支持，提供充足的实验室资源；
3.对本项目提供技术支持，全面教授项目组成员各种实验技术；
4.对本项目进行监督，督促项目组成员按时完成任务。
校级

项目成员

序号 学生 所属学院 专业 年级 项目中的分工 成员类型
平荟煜 临床医学院（附属医院） 临床医学（本科-基础医学院） 2022 实验设计、数据统计与分析
邢智超 护理学院 护理学（康养方向） 2023 蛋白水平分析
鲁雪仪 临床医学院（附属医院） 临床医学（本科-临床医学院） 2022 小鼠饲养及动物解剖
王鑫婕 临床医学院（附属医院） 儿科学（本科） 2023 细胞体外培养与转染
沈嬿琳 医学影像与检验学院 医学影像学（本科） 2023 免疫组化染色、HE染色

指导教师

序号 教师姓名 所属学院 是否企业导师 教师类型
孟凯 科研处 否
王晓梅 基础医学院 否

立项依据

  1.明确ESR1和ESR2调控卵巢癌细胞生物学行为的具体作用。
  2.阐明ESR1和ESR2调控卵巢癌的关键通路及分子机制。
  1．ESR1和ESR2在卵巢癌细胞生长中的作用研究
  前期研究我们构建了多种卵巢癌细胞系，通过RT-qPCR和蛋白质印迹检测发现ESR1和ESR2分别在细胞系SKOV3和COAV3中高表达。随后我们采用雌激素对SKOV3和COAV3进行处理，结果显示雌激素显著促进SKOV3细胞的增殖，而对COAV3细胞无明显促进作用。为进一步探究ESR1与ESR2在癌细胞发展中的具体作用，本部分我们将做如下研究：
  ①构建shRNA慢病毒载体敲低ESR1（SKOV3细胞）和ESR2（COAV3细胞），通过RT-qPCR、WB验证敲低效率，结合雌激素处理、CCK8、TUNEL检测增殖与凋亡变化，探究ESR1或ESR2下调对雌激素促增殖/抗凋亡功能的影响；
  ②在低表达细胞系中分别添加ESR1激动剂PPT或ESR2激动剂DPN，检测基因表达恢复后雌激素诱导的增殖/凋亡效应，探究ESR1或ESR2上调对雌激素促增殖/抗凋亡功能的影响；
  ③建立裸鼠移植瘤模型，对比空载体与敲低组（SKOV3-shESR1、COAV3-shESR2）的肿瘤生长、转移及病理特征（HE/Ki67/TUNEL），验证ESR1与ESR2在卵巢癌细胞生长中功能。

  2. ESR1和ESR2通过相关通路调控肿瘤细胞行为的分子机制研究
  前期我们通过RNA-seq和生物信息学分析初步筛选出了雌激素影响细胞系SKOV3和COAV3增殖迁移的可能调控的关键信号通路。结果显示SKOV3中上调基因富集于Hippo通路，下调无显著通路；COAV3中上调基因富集于Hedgehog和Apelin通路，下调基因关联ATP dependent chromatin remodeling（ATP依赖性染色质重塑）和Chemical carcinogenesis DNA adducts（化学致癌-DNA加合物）通路。在此基础上，为进一步探究ESR1和ESR2通过相关通路调控肿瘤细胞行为的分子机制，本部分我们将做如下研究：
  ①设置对照组、雌激素组和雌激素＋ESR1抑制剂组，分析YAP/TAZ核定位及Hippo靶基因表达，明确雌激素是否通过ESR1调控Hippo通路基础活性；设置对照组、雌激素组、雌激素+ESR2抑制剂组，检测Hedgehog（Gli1）、Apelin（APJ磷酸化）、染色质重塑（BRG1/BRM）、DNA损伤修复（γH2AX）通路活性，明确雌激素是否通过ESR2调控以上关键通路基础活性；
  ②构建空载体与ESR1敲低细胞系（均±雌激素处理），复测Hippo活性及经典ESR1靶基因，明确ESR1对雌激素激活Hippo通路的必要性；构建空载体与ESR2敲低细胞系（均±雌激素处理），复测上述四通路标志物，明确ESR2对雌激素抑制Hedgehog/Apelin通路、激活染色质重塑/DNA损伤通路的必要性；
  ③设置对照组、雌激素组、Hippo通路抑制剂组与雌激素＋Hippo抑制剂组，评估细胞增殖、侵袭能力（EdU/Transwell）及裸鼠体内肿瘤生长情况（Ki67/TUNEL），验证Hippo通路在ESR1介导肿瘤进展中的作用；设置对照组、雌激素组、各通路抑制剂组与雌激素＋抑制剂联用组，针对Hedgehog和Apelin通路，同理检测增殖、侵袭能力及裸鼠成瘤情况。针对染色质重塑和DNA损伤通路，检测凋亡（Annexin V/PI）、DNA损伤（彗星实验）及肿瘤组织γH2AX，明确各通路在ESR2介导肿瘤进展中的作用。

  3. ESR1和ESR2通过相关通路调控肿瘤进展的靶向干预研究
  前期我们对ESR1和ESR2通过相关通路调控肿瘤细胞行为的分子机制进行了系统探究，为进一步确认关键通路调控肿瘤细胞行为的特异性，本部分我们将做如下研究：
  ①在经通路抑制剂处理的细胞中，通过基因转染或蛋白回补重新激活关键基因或蛋白，检测细胞增殖、迁移、侵袭能力及分子标志物表达。若细胞功能恢复，可证实相关通路在雌激素调控肿瘤细胞行为中的关键作用，并验证靶向抑制的治疗效果及靶点特异性。
  ②建立裸鼠移植瘤模型，给予靶向抑制剂模拟临床治疗，监测肿瘤生长曲线及病理指标（如Ki67表达、TUNEL染色）。通过对比体外与体内结果，明确通路调控的生理相关性。
  卵巢癌是全球范围内较为常见的妇科癌症，恶性程度高、复发率高且预后差，严重威胁着女性的生理和心理健康[1]。据统计，世界上每年约有140000卵巢癌死亡病例，并且有研究预测到2040年卵巢癌的新发病例和死亡人数将会持续增加[2, 3]。由于卵巢癌早期无症状生长，或有症状但无特异性，导致近70%的患者前期未能确诊，直到逐渐发展至癌症晚期[4]。生活中绝大多数卵巢癌属于上皮性卵巢癌（EOC），它又可以分为两大类：Ⅰ型和Ⅱ型肿瘤。Ⅰ型涵盖低级别浆液性癌、粘液性癌、子宫内膜样癌、透明细胞癌；Ⅱ型则是以高级别浆液性癌为主，其侵袭性较强，在EOC中所占的比例约为75%[5]。目前，卵巢癌的治疗主要依赖于手术和化疗，但是治疗效果并不理想[6, 7]。含铂药物和紫杉烷是较为常用的化疗药物，一旦使用剂量过大，很可能引发副作用和并发症，同时，癌细胞也会很快对化疗产生耐药性[8, 9]。此外，卵巢癌具有高度异质性，这导致其临床诊断和治疗面临重重困境：一方面卵巢癌存在多种组织学分型和癌细胞亚群，不同分型癌症的生物学行为、预后及治疗不同，不同癌细胞在基因表达、增殖能力上也存在显著差异；另一方面卵巢癌独特的肿瘤微环境严重影响着癌细胞的增殖、迁移和侵袭[10, 11]。因此，深入探究卵巢癌的发病机制以及寻找更为精准的治疗措施迫在眉睫。
  卵巢癌存在多种风险因素，包括遗传、生殖、炎症和手术等方面[12]。最近，越来越多的研究将目光聚焦于激素对卵巢癌所产生的影响。其中，雌激素在卵巢癌的发展中扮演着重要角色[11, 13]。雌激素是一种重要的女性激素，对女性的生殖系许多其他身体功能有关键作用。其主要包括以下三种：雌酮（E1）、雌二醇（E2）和雌三醇（E3），最常见且最活跃的是E2 [14]。目前，雌激素被认为通过调控细胞的增殖、侵袭以及凋亡促进卵巢癌的发生[15] 。研究发现，E2能够上调人卵巢癌细胞系SKOV3膜蛋白ezrin的表达水平,进而促进癌细胞增殖及运动 [16, 17]，增强SKOV3和OVCAR3细胞的存活能力[18]。然而，雌激素并非能够促进所有的卵巢癌细胞系，Varga Alexandra等人研究表明高浓度雌激素可以对A2780细胞系的增殖产生抑制作用[19]。并且，雌激素受体（ER）在上述过程中发挥了重要作用。ER通常分为两类：核受体和膜受体，核受体包括ERα和ERβ。在人体组织中，ESR1基因编码ERα，ESR2基因编码ERβ，尽管它们的结构相似，但它们在组织分布和功能上存在差异[20]。最新的研究表明，ESR1是一种促癌基因，能够促进癌细胞的增殖和肿瘤的生长，而ESR2则是一种抗癌基因，可以显著降低细胞的运动和侵袭，从而使肿瘤生长减慢[15]。Wang M等人通过构建过表达和敲低ESR1模型探究ESR1在卵巢癌中的作用，发现ESR1过表达促进SKOV3细胞系的增殖、迁移和侵袭[21]。而先前的研究已经证实ESR2具有抑制SKOV3细胞生长与运动的功能，并且还能够诱导细胞凋亡[22]。这都提示我们ESR1和ESR2在生理和病理过程中发挥不同甚至相反的生物学作用。综上所述，鉴于卵巢癌的高度异质性特征，ESR1和ESR2在调控肿瘤发展过程中可能呈现出不同的作用机制。基于此，本项目通过系统探究雌激素通过ESR1和ESR2对卵巢癌细胞生长的影响，旨在进一步阐明ESR1、ESR2调控卵巢癌细胞生物学行为的潜在分子机制（图1），为卵巢癌的早期筛查、预后管理优化及个体化诊疗策略的制定奠定理论基础。
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图1. ESR1和ESR2在卵巢癌细胞中的差异化调控机制研究简图
（本图由 Figdraw 绘制）
  参考文献
1. Zhou, M., et al., Overview of splicing variation in ovarian cancer. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Reviews on Cancer, 2025: p. 189288.
2. Penny, S.M., Ovarian cancer: an overview. Radiologic technology, 2020. 91(6).
3. Cabasag, C.J., et al., Ovarian cancer today and tomorrow: A global assessment by world region and Human Development Index using GLOBOCAN 2020. International journal of cancer, 2022. 151(9): p. 1535-1541.
4. Salas Bolívar, P., et al., Prognostic Factors After the First Recurrence of Ovarian Cancer. Journal of Clinical Medicine, 2025. 14(2): p. 470.
5. Nakayama, K., et al., Current concept of low-grade serous ovarian carcinoma. Translational Cancer Research, 2024. 13(1): p. 6.
6. Konstantinopoulos, P.A. and U.A. Matulonis, Clinical and translational advances in ovarian cancer therapy. Nature cancer, 2023. 4(9): p. 1239-1257.
7. Sun, C., et al., Targeting platinum-resistant ovarian cancer by disrupting histone and RAD51 lactylation. Theranostics, 2025. 15(7): p. 3055.
8. Aggarwal, R., et al., Understanding gold nanoparticles and their attributes in ovarian cancer therapy. Molecular Cancer, 2025. 24(1): p. 88.
9. Shukla, D., et al., MicroRNA-379-5p attenuates cancer stem cells and reduces cisplatin resistance in ovarian cancer by regulating RAD18/Polη axis. Cell Death & Disease, 2025. 16(1): p. 140.
10. Kim, S., B. Kim, and Y.S. Song, Ascites modulates cancer cell behavior, contributing to tumor heterogeneity in ovarian cancer. Cancer science, 2016. 107(9): p. 1173-1178.
11. Mungenast, F. and T. Thalhammer, Estrogen biosynthesis and action in ovarian cancer. Frontiers in endocrinology, 2014. 5: p. 192.
12. Hunn, J. and G.C. Rodriguez, Ovarian cancer: etiology, risk factors, and epidemiology. Clinical obstetrics and gynecology, 2012. 55(1): p. 3-23.
13. Pedernera, E., et al., 17β-Hydroxysteroid dehydrogenase type I and aromatase in ovarian cortical inclusion cysts. Endocrine Connections, 2025. 14(4).
14. Chen, P., B. Li, and L. Ou-Yang, Role of estrogen receptors in health and disease. Frontiers in endocrinology, 2022. 13: p. 839005.
15. Kozieł, M.J. and A.W. Piastowska-Ciesielska, Estrogens, estrogen receptors and tumor microenvironment in ovarian cancer. International journal of molecular sciences, 2023. 24(19): p. 14673.
16. Song, J., et al., Estradiol-induced ezrin overexpression in ovarian cancer: a new signaling domain for estrogen. Cancer letters, 2005. 220(1): p. 57-65.
17. Ding, J.-X., et al., The reinforcement of invasion in epithelial ovarian cancer cells by 17β-Estradiol is associated with up-regulation of Snail. Gynecologic oncology, 2006. 103(2): p. 623-630.
18. Boscaro, C., et al., MiR-206 inhibits estrogen signaling and ovarian cancer cell migration without affecting GPER. Life Sciences, 2023. 333: p. 122135.
19. Varga, A., et al., Suppressing the PI3K/AKT pathway by miR-30d-5p mimic sensitizes ovarian cancer cells to cell death induced by high-dose estrogen. Biomedicines, 2022. 10(9): p. 2060.
20. Xu, X.-L., et al., Estrogen biosynthesis and signal transduction in ovarian disease. Frontiers in Endocrinology, 2022. 13: p. 827032.
21. Wang, M., et al., Isorhamnetin inhibits progression of ovarian cancer by targeting ESR1. Annals of translational medicine, 2022. 10(22): p. 1216.
22. Schüler-Toprak, S., et al., Effect of estrogen receptor β agonists on proliferation and gene expression of ovarian cancer cells. BMC cancer, 2017. 17: p. 1-9.
  1.创新点
  当前针对雌激素受体靶向疗法的研究多集中于乳腺癌及其他妇科疾病领域，而关于ESR1、ESR2在卵巢癌发展进程中的潜在分子机制仍存在研究空白。本项目创新性地结合生物信息学手段，明确雌激素影响细胞系SKOV3和COAV3增殖迁移的信号通路，并深入阐明ESR1和ESR2在调控卵巢癌发展中的内在作用机制，为卵巢癌的临床诊断及治疗和预后提供新了新的理论依据和应用线索。
  2.项目特色
  卵巢癌死亡率高、复发率高且预后差，严重威胁着女性的生理和心理健康，而雌激素及其受体表达失衡被证实能够影响卵巢癌细胞的增殖迁移。本项目以雌激素受体为切入点，深入探讨其在癌细胞生长和肿瘤形成中的具体作用，运用生物信息学从关键因子和信号通路层面揭示了ESR1和ESR2调控卵巢癌的关键通路及分子机制，这对于优化现有的治疗策略和制定更加精准的治疗方案具体重要意义。
  1.技术路线
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  2.拟解决的问题
  明确ESR1和ESR2在卵巢癌细胞生长中的作用；分析雌激素通过ESR1和ESR2对卵巢癌细胞增殖迁移的信号通路的影响；揭示ESR1和ESR2通过相关通路调控卵巢癌发展中的内在作用机制。
  3.预期成果
  ①明确ESR1和ESR2在卵巢癌细胞生长中的作用；
  ②明确ESR1和ESR2调控卵巢癌细胞生物学行为的具体机制及潜在治疗靶点。
  ③发表学术论文 1-2 篇。
  本项目计划实施年限是2年，实施时间是 2025.05-2027.05
  2025.05-2026.05
  ①研究ESR1和ESR2对卵巢癌细胞系增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响；
  ②研究ESR1和ESR2对卵巢癌细胞体内体外成瘤实验的影响。
  2026.06-2026.12
  ①筛选并验证雌激素通过ESR1和ESR2影响卵巢癌细胞增殖迁移的关键信号通路；
  ②研究ESR1和ESR2通过相关通路调控肿瘤细胞行为的分子机制及潜在治疗靶点；
  2027.01-2027.05
  整理数据，撰写并发表论文。
  1.与本项目有关的研究积累
  ① ESR1与ESR2 mRNA在多种卵巢癌细胞系中的表达分析
  本项目前期成功培养了多种卵巢癌细胞系，我们通过检测卵巢癌细胞系SKOV3、COAV3、OVCAR3和A2780中ESR1与ESR2 mRNA的表达情况，发现ESR1主要在细胞系SKOV3中表达（图2A），而ESR2则主要在COAV3中表达（图2B）。
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图2. ESR1与ESR2 mRNA在卵巢癌细胞系SKOV3、COAV3、OVCAR3、A2780中的表达水平，***P<0.001
A：ESR1在四种卵巢癌细胞系中的mRNA表达量；B：ESR2在四种卵巢癌细胞系中的mRNA表达量

  ② 雌激素对卵巢癌细胞系SKOV3与COAV3增殖的影响
  本项目前期通过使用不同浓度的雌二醇（0、1nM、10nM、100nM）处理细胞系SKOV3与COAV3，并在24h、48h、72h后采用CCK8法评估细胞增殖情况。结果显示，雌二醇显著促进了细胞系SKOV3的增殖（图2A），而对COAV3的增殖影响不显著（图3B）。
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图3.梯度浓度雌激素对卵巢癌细胞系SKOV3与COAV3增殖的影响，*p<0.05
A：SKOV3在不同浓度雌二醇处理下的增殖情况；B：COAV3在不同浓度雌二醇处理下的增殖情况

  ③ 雌激素对卵巢癌细胞系SKOV3与COAV3迁移的影响
  本项目前期通过使用不同浓度的雌二醇（0mmol、1mmol、10mmol）处理细胞系SKOV3与COAV3，并在72h后采用Transwell迁移实验评估细胞侵袭能力变化。结果显示，雌二醇显著促进了细胞系SKOV3的迁移，而对COAV3的迁移影响不显著（图4A，B）。
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图4.梯度浓度雌激素对卵巢癌细胞系SKOV3与COAV3迁移能力的影响
A：SKOV3与COAV3在不同浓度雌二醇处理下的迁移情况；B：梯度浓度雌激素作用下，SKOV3与COAV3侵袭能力差异对比（相同字母表示无统计学差异，不同字母表示存在统计学差异，p<0.05）

  ④ SKOV3、COAV3卵巢癌细胞的差异表达基因分析
  为进一步探究ESR1和ESR2在癌细胞发展中的具体功能，项目的前期对卵巢癌细胞SKOV3和COAV3进行了RNA-seq分析，如图所示，细胞系SKOV3 RNA测序检测到67个差异基因(42个上调，25个下调)，细胞系COAV3 RNA测序检测到121个差异基因(59个上调，62个下调)。
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图5.卵巢癌细胞差异基因火山图和热图
A和B：卵巢癌细胞系SKOV3和COAV3的差异基因热图；C和D：卵巢癌细胞系SKOV3和COAV3的差异基因火山图

  ⑤ 卵巢癌细胞SKOV3、COAV3的相关通路分析
  本项目前期对SKOV3和COAV3卵巢癌细胞进行KEGG富集分析，结果显示，SKOV3中上调基因富集于Hippo通路，下调无显著通路（图6A,B），COAV3中上调基因富集于Hedgehog和Apelin通路，下调基因关联ATP dependent chromatin remodeling和Chemical carcinogenesis DNA adducts通路（图6C,D）。
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图6.卵巢癌细胞SKOV3和COAV3的关键通路分析
A和B：细胞系SKOV3上调和下调差异基因的KEGG分析图；C和D：细胞系COAV3上调和下调差异基因的KEGG分析图

  2.已取得的成绩
  申请者基于指导教师的研究工作和指导意见提出此课题，近五年来指导教师在卵巢发育及疾病方面发表SCI论文20余篇，在卵巢发育与相关疾病方面具有丰富的知识和经验，能够为我们研究雌激素调控卵巢癌的具体机制提供专业的理论指导。代表性论著如下：
  1.Identification of differential molecular characteristics and key genes between low-and high-grade serous ovarian cancer by bioinformatics analysis. European Journal of Gynaecological Oncology.该论文通过生物信息学技术对基因表达综合数据库中两个基因表达谱(GSE27651和GSE73168)进行分析筛选，探究了高/低浆液性卵巢癌中差异表达基因的富集途径和生物学过程。本人和成员在老师的教导下已熟练掌握差异基因分析技术，在差异基因的筛选及分析方面积累了丰富的经验。
  2.Molecular mechanism of Wilms’ tumor (Wt1)(+/− KTS) variants promoting proliferation and migration of ovarian epithelial cells by bioinformatics analysis. Journal of Ovarian Research.该论文表明Wt1（+KTS）和Wt1（−KTS）过表达可显著促进人卵巢上皮细胞HOSEpiC的增殖和迁移。本人和成员已熟练掌握细胞培养、载体构建等相关实验技术的运用，为该项目奠定了坚实的基础。
  3.Research progress of extracellular vesicles in the treatment of ovarian diseases." Experimental and therapeutic medicine.该论文系统总结了外泌体在治疗卵巢癌、早发性卵巢功能不全、多囊卵巢综合征三种卵巢疾病中的相关作用机制及潜力。本人和成员通过文献的查阅以及综述的撰写已对卵巢癌相关知识进行了深入了解，为本项目的相关实验奠定理论及思路基础。
  项目组成员依托学校科研平台，积极参与指导老师的科研项目，在技术方面积累了丰富经验。
  因此，团队成员具有扎实的理论基础与娴熟的技术操作，指导老师具有丰富的多方经验和支持，这为本项目的顺利实施奠定良好基础。
  本项目主要依托济宁医学院公共科研平台和实验动物中心进行，完全具备开展本项目的所有仪器设备；该项目组成员已基本掌握开展本项目的细胞培养、实时定量 PCR、免疫荧光染色、HE染色、Transwell实验、蛋白质免疫印迹、小鼠饲养及生殖相关手术等实验技术。实施本项目的实验条件和仪器设备均已具备。

经费预算

开支科目 预算经费（元） 主要用途 阶段下达经费计划（元）
前半阶段 后半阶段
预算经费总额 20000.00 购买试剂及论文出版 16000.00 4000.00
1. 业务费 4000.00 无 0.00 4000.00
（1）计算、分析、测试费 0.00 无 0.00 0.00
（2）能源动力费 0.00 无 0.00 0.00
（3）会议、差旅费 0.00 无 0.00 0.00
（4）文献检索费 0.00 无 0.00 0.00
（5）论文出版费 4000.00 论文出版·费用 0.00 4000.00
2. 仪器设备购置费 0.00 无 0.00 0.00
3. 实验装置试制费 0.00 无 0.00 0.00
4. 材料费 16000.00 无 16000.00 0.00
结束

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