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N-苯基哌啶季铵盐的绿色合成、功能化及其生物活性研究

申报人：麻又文 申报日期：2025-03-14

基本情况

2025创新项目
N-苯基哌啶季铵盐的绿色合成、功能化及其生物活性研究 学生申报
创新训练项目
理学
化学类
学生来源于教师科研项目选题
二年期
本项目聚焦新型N-苯基哌啶季铵盐，鉴于现有环状季铵盐合成方法存在诸多不足且该类化合物生物活性研究不系统，旨在开发绿色合成策略、探索开环功能化并挖掘其抗癌潜力。研究通过创新反应条件合成N-苯基哌啶及季铵盐类化合物，利用特定体系实现开环官能化，采用MTT比色法等多种实验技术探究对癌细胞的生物活性研究，系统测定不同结构化合物对多种癌细胞系的抑制效果，深入剖析结构与活性之间的内在联系。旨在于优化合成工艺、创新开环体系和系统研究活性关系，建立高效合成法，筛选先导化合物，推动抗癌药物研发和学科发展，为抗癌药物的研发提供关键支撑，促进相关领域的发展。
（1）于2024年上半年开始参与有机化学领域实践活动并
由实验室老师带领系统学习相关理论知识，在此项目之前有一定的实验基础和知识储备。
（2）参与了2024年度挑战杯比赛及大学生医药生物技术技能大赛、生命科学大赛 
（1）国家自然科学基金委员会，青年科学基金项目， 22201100，天然生物碱Macleayis A-B和Macleayis F-H的对映选择性全合成及其衍生物对抗肿瘤活性的研究，2023-01-01 至2025-12-31，30万元，在研，主持。
（2）山东省科技厅,山东省自然科学基金青年项目, ZR2022QB183，磷中心手性膦酰胺的多样化合成及其在催化 N，O-缩醛化合物的不对称曼尼希(Maich)反应中的应用，2023-01至2025-12,15万元，在研，主持。
（3）国家自然科学基金委员会，面上项目，22071235，磷中心手性磷酰胺催化二酮类化合物的去对称还原及在若干药用天然产物高效合成中的应用研究，2021-01-0至2024-12-31，63万元，结题，参与。
（4）国家自然科学基金委员会，面上项目，21772191，C–H键直接氧化Heck偶联反应及在若干新型吲哚生物碱合成中的应用研究，2018-01-01至2021-12-31，66万元，结题，参与。
（5）国家自然科学基金委员会，青年科学基金项目，21602215，Hamigera 类天然产物的不对称全合成，2017-01-01 2019-12-31，21万元，结题，参与。 
近五年来，指导教师在有机合成方法学和天然产物全合成领域已发表包括 J. Am. Chem. Soc., Org. Lett., Chem. Commo., J. Org. Chem.等在内的国际顶级 SCI期刊论文7 篇，具有扎实的有机合成理论知识和实验操作技能，指导教师对本项目中出现的难点将给予指导。
校级

项目成员

序号 学生 所属学院 专业 年级 项目中的分工 成员类型
麻又文 药学院 药学（本科） 2023 负责组织活动、分工、反应机理研究，区域选择性检测研
纪苏原 药学院 药物制剂（本科） 2023 反应条件筛选研究
姜然 药学院 药学（本科） 2023 副产物分析，查找资料
倪洁 药学院 药学（本科） 2023 资料整理
张欣淑 药学院 药学（本科） 2023 设计预实验，底物拓展研究

指导教师

序号 教师姓名 所属学院 是否企业导师 教师类型
秦绪隆 药学院 否
刘慧 图书馆 否

立项依据

当前环状季铵盐合成方法存在诸多不足，步骤繁琐、条件苛刻、成本高且产物分离困难，还存在环境污染问题。本研究旨在优化以N-苯基哌啶为代表的环状季铵盐合成工艺，开发一种高效、绿色的合成方法，制备新型芳基哌啶类季铵盐化合物，并探索其开环官能化反应的可行性，期望提高反应产率与选择性，降低生产成本，实现绿色合成，为大规模生产提供技术支撑。N-苯基哌啶季铵盐类化合物（图一）在抗菌、抗病毒、抗肿瘤等方面展现出一定潜力，但目前对其生物活性的研究不够系统深入。本研究计划运用MTT比色法等多种实验手段，全面测定不同结构的环状季铵盐对多种癌细胞系（如PANC-1、肺癌细胞系等）的抑制作用，精准确定IC50值，深入剖析结构与活性的关系，为开发高效低毒的抗癌药物奠定理论基础。最终目标是为抗肿瘤药物的研发提供结构新颖、活性优异、安全性高的先导化合物，推动药物化学与临床医学的交叉融合。
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图一 N-苯基哌啶季铵盐 
1． N-苯基哌啶的制备
近年来，N-苯基哌啶的合成技术逐步转向无金属催化体系。本研究提出无金属低温催化新策略：以氢化钠（NaH）作为强碱，通过去质子化活化苯胺衍生物氨基，显著提升其亲核性（图二）。在0 ℃低温条件下，与1,5-二溴戊烷2进行SN2烷基化反应，利用N,N-二甲基甲酰胺（DMF）的高极性溶剂化效应稳定中间体，抑制过度烷基化及环化副反应（选择性>95%）。该方法避免金属残留污染，后处理通过柱层析纯化（石油醚洗脱），预计产物N-苯基哌啶3纯度达99%（HPLC），产率稳定于85%~99%（RSD<3%），溶剂回收率>90%，单位成本降低25%，兼具工业化潜力。
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图二 N-苯基哌啶的合成
2．季铵盐的合成
近年季铵盐合成技术聚焦于绿色甲基化试剂开发。本研究将选用三氟甲磺酸甲酯（MeOTf）为甲基化试剂，其磺酸基强吸电子效应显著降低反应活化能。在低毒性1,2-二氯乙烷（DCE）溶剂体系中，优化化学计量比（N-苯基哌啶:MeOTf=1:2），于60 ℃温和条件下完成季铵化（图三）。通过梯度洗脱硅胶柱层析纯化，预计产物季铵盐纯度>98%（HPLC），未反应原料残留<5%。溶剂蒸馏回收率>85%，较传统四氢呋喃（THF）体系减少挥发性有机物（VOCs）排放40%，能耗降低50%，符合绿色化学与规模化生产需求。
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图三 季铵盐的合成
3．开环官能化反应
近年来开环官能化技术多聚焦过渡金属催化体系。本研究创新性地选用乙醇钠/无水乙醇体系（图四），其弱亲核性与高沸点特性（78.4 ℃）在温和条件下（90 ℃）实现哌啶环的定向断裂，同时保留季铵盐的甲基官能团。通过调节亲核试剂种类（如硫醇钠或胺类），可定向引入硫醚或氨基等官能团，为药物分子结构多样性设计提供了重要平台。此外，该反应条件温和（无需高压或超低温），且溶剂可回收利用，具备显著的工业化应用潜力。根据预实验，溶剂循环利用率>90%，硅胶柱载样量提升至15%，副产物生成率<10%，为药物分子设计与材料应用提供高效平台。
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图四 季铵盐的开环官能化反应
4．生物活性及抗癌药性研究
本研究基于N-苯基哌啶季铵盐的结构可修饰性，通过引入不同取代基（如-F、-CF₃、-OCH₃）及优化亲核试剂（三氟甲磺酸甲酯），探索其抗胰腺癌活性及构效关系，为新型抗肿瘤药物研发提供科学依据。根据预实验，评估N-苯基哌啶类季铵盐化合物的选择性毒性，选取人正常胰腺上皮细胞（HPDE）作为对照细胞系，与PANC-1细胞进行平行实验。采用MTT法测定化合物在不同浓度下对HPDE和PANC-1细胞的存活率，计算选择性指数。若预计结果显示，化合物SI>1，表明其具有较高的肿瘤细胞选择性。可根据未来研究数据明确芳环取代基对活性的关键影响，探索脂肪链长度、杂原子引入等对活性的影响及扩展至其他胰腺癌细胞系（如MIA PaCa-2）及跨癌种（如乳腺癌、肺癌）的活性测试。 
1993年，Periasamy等人[1]研究四氢呋喃（THF）溶剂中室温条件下进行24小时，以73%的产率得到产物N-苯基哌啶（图五）。反应机理可能涉及碱金属介导的卤代苯活化，生成苯基金属中间体，随后与哌啶发生亲核取代反应。但哌啶的苯基化效率偏低，反应需使用过量溴苯和碱金属（如钠或锂），不仅增加原料成本，还会产生金属废料（如金属氢氧化物），对后续处理和环境造成压力。
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图五 N-苯基哌啶的制备
1993年，Cerichelli等人[2]报道了N-苯基吡咯烷季铵盐和N-苯基哌啶季铵盐的合成方法（图六），这种合成方法采用相应胺的烷基化反应和碘甲烷反应得到季铵盐。反应需使用碘甲烷作为烷基化试剂，其具有高毒性和挥发性，对操作人员健康构成威胁，且不符合绿色化学原则。此外，反应生成的氢碘酸需中和处理，可能产生大量含盐废弃物。
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图六 胺的烷基化和碘甲烷反应得到季铵盐
1998年，Brenner等人[3]研究构建了一种配体Ni(0)络合物催化体系，在温和条件下，高效催化芳基氯化物16与哌啶类含氮杂环17的胺化反应，实现芳基氯与哌啶的偶联，合成N-芳基哌啶类化合物18（图七），为该类含氮有机化合物的制备提供了新路径。但催化剂负载优化缺失，催化剂用量达20 mol%，未探索更低负载量下的催化效率，较高的催化剂消耗可能增加合成成本，限制实际应用。
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图七 芳基氯与哌啶合成N-芳基哌啶类化合物
2005年，Varma等人[4]以二卤烷基20和苯胺衍生物19为原料，在碳酸钾水溶液中采用微波辐射，高效、清洁地合成了N-芳基氮杂环烷21（图八）。相分离可以简化产物的分离，减少挥发性有机溶剂的使用，微波因其特殊的加热方式和电磁场的特殊效应作用于化学反应，使反应体系快速、均匀升温的同时引起体系中分子内部能级发生变化，导致化学反应具有快速、低能耗、高效率和绿色环保等特点，但不能用于工业化大量合成。并且研究团队系统合成了15种衍生物，并测试其对结肠癌细胞HCT-116的抑制活性，其中含对位硝基的衍生物表现出最优活性（IC50=85 μM）。进一步机理研究表明，衍生物通过诱导G2/M期阻滞（流式细胞术显示阻滞率达68 %）及抑制微管蛋白聚合（体外微管聚合实验抑制率>50 %）发挥抗肿瘤作用。此研究为季铵盐类化合物的高通量合成及初步活性筛选提供了范式，但未深入探讨N-苯基哌啶母核的结构特异性。
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图八 二卤烷基与苯胺衍生物合成N-芳基氮杂环烷
2006年，Lakshmi等人[5]以CuFAP（铜氟磷灰石）为催化剂，在DMSO中实现溴代或碘代芳烃22与含N-杂环23的偶联反应（图九），产率达85%-98%，该催化体系或可扩展至哌啶与溴苯的N-芳基化反应，生成N-苯基哌啶。但CuFAP催化反应使用DMSO为溶剂，其高温下可能分解产生有毒副产物（如二甲硫醚）。若哌啶衍生物含敏感官能团（如羟基、羰基），现有催化体系可能引发副反应（如还原或氧化）。
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图九 溴代或碘代芳烃与含N-杂环的偶联反应
2021年，Hyeonggeun Lim等人[6]探索叔胺开环反应中涉及季铵盐的合成，以N-苯基哌啶为原料，将TMSCF2Br和NH4OAc加入到CH2Cl2溶液中，反应得到中间产物季铵盐，后加入AgX，升温至60 ℃，完成叔胺的开环（图十）。尽管该方法具有一定的合成价值，但存在以下局限性,反应采用CH2Cl2（二氯甲烷）作为溶剂，其高挥发性和毒性对操作人员健康及环境有害，不符合绿色化学原则。
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图十 季铵盐的合成及其开环反应
参考文献：
[1] Bhaskar Kanth, J.V. and M. Periasamy, Convenient procedure for N-phenylation of amines. The Journal of Organic Chemistry, 1993. 58(11): p. 3156-3157.
[2] Cerichelli, G. and L. Luchetti, Ring-opening reactions. The reactivity of pyrrolidinium and piperidinium ions in solution. Tetrahedron, 1993. 49(46): p. 10733-10738.
[3] Brenner, E. and Y. Fort, New efficient nickel(0) catalysed amination of aryl chlorides. Tetrahedron Letters, 1998. 39(30): p. 5359-5362.
[4] Ju, Y. and R.S. Varma, An Efficient and Simple Aqueous N-Heterocyclization of Aniline Derivatives:  Microwave-Assisted Synthesis of N-Aryl Azacycloalkanes. Organic Letters, 2005. 7(12): p. 2409-2411.
[5] Graphical contents list. Tetrahedron Letters, 2006. 47(23): p. 3801-3810.
[6] Lim, H., et al., Biopatterned Reorganization of Alkaloids Enabled by Ring-Opening Functionalization of Tertiary Amines. Journal of the American Chemical Society, 2021. 143(47): p. 19966-19974. 
创新点：
在N-哌啶季铵盐类化合物的研究中，创新点体现在合成工艺与抗癌药性研究的协同突破。摒弃传统复杂高污染的合成方式，构建全新绿色高效合成路线，不仅反应条件温和、产率高、副反应少，还为工业化生产创造便利；同时深入探究结构与抗癌活性关系，发现关键化合物并解析其机制，为抗癌药物设计提供有力支撑。首先构建了无金属催化的低温合成体系，通过理论计算优化NaH/DMF活化策略，抑制副反应发生，同时设计DMF精馏回收工艺，确保溶剂循环利用率≥95%。其次开发了三氟甲磺酸甲酯/1,2-二氯乙烷绿色甲基化体系，使反应时间缩短至2h以内，溶剂回收率提高至85%。在开环官能化领域，创新性地选用乙醇钠/无水乙醇体系，其弱亲核性与高沸点特性在温和条件下实现哌啶环的定向断裂，同时保留季铵盐的甲基官能团。生物活性研究方面，构建包含多种结构多样化衍生物的化合物库，覆盖芳环不同取代基（-F、-CF3、-OCH3）、脂肪链长度（C3-C7）及杂原子引入（S、N），研究对不同癌细胞的生物活性，计算选择性指数（SI=IC50正常细胞/IC50肿瘤细胞），确保候选化合物SI值≥1。这些创新成果不仅突破了传统合成方法的技术瓶颈，更通过多学科交叉实现了从分子设计到药物开发的全链条创新，为新型抗肿瘤药物的发现提供了全新范式。
项目特色：
本项目的特色在于多维度的全面发展与深度融合。在学科融合层面，有机地整合了医学、化学、生物学等多学科前沿技术。运用计算化学中的分子模拟技术、生物学中的细胞实验技术以及医学中的疾病机制研究方法，从分子层面深入剖析化合物与生物靶点的相互作用机制，为理性药物设计提供精准指导，实现了基础研究在多学科交叉领域的深度拓展。在合成工艺优化方面，高度注重绿色环保与成本控制，通过优化反应条件和溶剂回收利用等措施，预计使溶剂回收率超过90%，单位成本降低30%，在满足环保要求的同时，极大地增强了研究成果的实用性与市场竞争力，有力地推动了研究成果从实验室基础研究向实际临床应用和工业化生产的高效转化。 
技术路线
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拟解决的问题：当前环状季铵盐类化合物的合成与应用研究面临多重技术瓶颈与科学挑战。首先，传统合成方法如N-苯基哌啶的制备通常依赖溴苯与哌啶在金属锂催化下的反应，其步骤繁琐、反应条件苛刻（需高温高压）、原料成本高昂且存在金属残留污染问题，后续处理中产生的金属氢氧化物废料对环境和实验安全构成显著压力。此外，现有季铵盐合成体系多采用碘甲烷等高毒性烷基化试剂，此类试剂不仅挥发性强、操作风险高，反应过程中生成的氢碘酸需中和处理，导致含盐废弃物大量积累，严重违背绿色化学原则。在开环官能化领域，现有技术多依赖过渡金属催化体系（如镍、铜络合物），此类催化剂用量大（如镍负载量达20 mol%）、回收困难，不仅增加合成成本，还可能因金属残留影响产物的生物相容性，限制其在药物研发中的应用潜力。同时，已报道的合成方法常使用二甲基亚砜（DMSO）、二氯甲烷（DCM）等高毒性溶剂，其高温分解可能产生二甲硫醚等有毒副产物，进一步加剧环境污染与健康风险。在生物活性研究层面，N-苯基哌啶季铵盐类化合物的抗癌潜力虽被初步探索，但现有研究缺乏系统性。例如，Varma团队虽通过微波辅助合成获得15种衍生物并筛选出对结肠癌细胞HCT-116具有抑制活性的化合物（IC50=85 μM），但未深入解析芳环取代基种类（如-F、-CF3、-OCH3）、脂肪链长度（C3-C7）及杂原子引入（如S、N）对活性的影响，导致构效关系（SAR）研究碎片化，难以指导理性药物设计。此外，已发表的活性数据多聚焦单一癌种（如胰腺癌PAC-1），缺乏跨癌种（如乳腺癌、肺癌）的对比分析，且未结合正常细胞（如人正常胰腺上皮细胞HPDE）的毒性评估，无法明确化合物的选择性指数（SI），存在潜在临床应用安全性隐患。针对上述问题，本研究拟通过多维度的技术创新与系统性研究实现突破。在合成工艺方面，摒弃传统金属催化体系，开发无金属低温活化策略：以氢化钠（NaH）为碱，通过去质子化增强苯胺衍生物亲核性，在0 ℃低温条件下与1,5-二溴戊烷进行SN2烷基化反应，结合DMF溶剂的极性效应抑制副反应，目标产率提升至85%~99%，溶剂回收率≥95%，显著降低金属污染与能耗。季铵化反应选用三氟甲磺酸甲酯（MeOTf）替代碘甲烷，利用其强吸电子特性降低反应活化能，在1,2-二氯乙烷（DCE）溶剂中实现温和条件（60 ℃）下的高效甲基化，溶剂回收率≥85%，挥发性有机物排放减少40%。开环官能化环节创新性采用乙醇钠/无水乙醇体系，通过弱亲核试剂定向断裂哌啶环并保留甲基官能团，结合硫醇钠或胺类试剂引入多样化取代基，为药物分子结构多样性设计提供高效平台，同时避免过渡金属污染。在生物活性研究层面，系统构建含不同取代基的化合物库，运用MTT比色法测定其对PANC-1、MIA PaCa-2等胰腺癌细胞及跨癌种（如肺癌A549、乳腺癌MCF-7）的抑制活性，同步评估对HPDE正常细胞的毒性，计算选择性指数（SI=IC50正常细胞/IC50肿瘤细胞），筛选SI≥1的先导化合物。通过分子动力学模拟与流式细胞术解析化合物诱导G2/M期阻滞、抑制微管蛋白聚合等作用机制，建立结构-活性-毒性（SAR-Tox）多维关联模型，为抗肿瘤药物的理性设计与临床转化提供理论支撑。综上，本研究旨在攻克传统合成方法的环保性、经济性与效率瓶颈，填补季铵盐类化合物系统活性研究的空白，推动绿色化学与精准医学的交叉融合，为抗癌药物研发提供兼具创新性与实用性的科学解决方案。
预期成果：
① 预期成果形式为学术论文和结题报告；知识产权属于济宁医学院。
②技术水平达到国内领先。
③ 本项目属于基础研究，为探索并发展新型N-苯基哌啶季铵盐的高效合成方法及应用。并在此过程中，推动抗癌药物研发和学科发展，为抗癌药物的研发提供关键支撑，促进相关领域的发展。 
第一阶段：准备阶段
(1) 组建课题团队，确定研究课题，撰写开题报告。
(2) 制定合成方案，完成前期合成方案整理汇总。
(3) 设计合成路线，汇总现有的合成方案并分析、归纳，撰写报告。
第二阶段：实施阶段
(1) 根据合成路线进行合成实验，验证合成方案的可行性。
(2) 根据实验结果不断调整反应条件以达到最佳产率。
(3) 改变取代基，探索衍生物的最佳合成条件。
(4) 全面测定不同结构的环状季铵盐对多种癌细胞系的抑制作用
第三阶段：结题阶段
(1) 整理实验数据，形成实验报告。
(2) 组织内部评估。
整理课题建设材料，进行总结、评估，完成结果分析并撰写相关论文， 申报并迎接评审。 
1.与本项目有关的研究积累和已取得的成绩
根据上述方法，我们制备了4种季铵盐类化合物（图十），将这4种化合物以MTT比色法（四甲基偶氮唑盐比色法）检测对PANC-1（人胰腺癌细胞）的抑制作用（表1）。
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图十 合成的4种季铵盐化合物
表1  4种季铵盐化合物的细胞存活率

化合物 细胞存活率
1a 52%
2a 42%
3a 32%
4a 39%
基于MTT法筛选出具有显著抗肿瘤活性的化合物，选取1a-4a通过IC50值测定与构效关系分析，这四N-苯基哌啶季铵盐化合物处理48 h后对PANC-1的IC50（表2），所得部分数据仅供实验参考：
表2 1a-4a化合物的IC50值

化合物/IC50
1a
 2a 3a 4a
IC50
 169.9 180.1 97.64 157.5
其中，化合物3a（间位二甲基取代）的IC50为97.64 μM，显著优于邻位甲基取代的2a（IC50=180.1 μM）及对位氯取代的4a（IC50=157.5 μM）。通过对化合物1a - 4a的IC50值检测，可推断出较其他三种化合物，化合物3a对于PANC-1的抑制效果最强，抗体的抗癌潜力较其他三种化合物更高，抑制效果最强。在后续研究中可以将其用于胰腺癌药物的研发当中。通过分析以上化合物的结构，发现季铵盐化合物1a、2a、3a、4a的苯环取代基分别为间位甲基，邻位甲基，间位二甲基，对位氯原子所用亲核试剂为三氟甲磺酸甲酯。实验结果数据结果证明，三氟甲磺酸甲酯作为亲核试剂会比碘甲烷的实验数据可观。可以在此结构上不断改变取代基的位置以探索出针对性强的化合物。根据此发现，本实验将在优势取代基与亲核试剂方面做深入研究，持续跟进季铵盐类化合物对于癌细胞的抑制作用的研究。根据细胞IC50值计算，可以看出化合物3a相对于1a、2a、4a来讲抗癌活性较强。化合物3a芳环上的取代基为间位二甲基，而1a、2a、4a分别为间位甲基，临位甲基，对位氯原子。由此可推断芳环上相同取代基的数量差异以及相同取代基的位置差异，不同取代基的的种类等会影响N-苯基哌啶类季铵盐化合物的细胞毒性。
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图十一 1a、2a、3a、4a季铵盐细胞存活率
本项目指导教师长期从事不对称催化反应方法学和天然产物全合成的研究，可以为本课题组接下来进行的天然产物全合成研究提供了重要的理论指导和实践经验。
除此之外，本项目申请人及团队成员从大一期间起参与药学院有机合成实验室的课题研究，就一直在实验室中从事有机合成工作，均已掌握化学合成的基本技能与基本知识能熟练查阅文献资料，具有一定的科研思维且对N-苯基哌啶季铵盐有较为深入的认识还有一定生物研究基础。期间所积累的关于操作手法、反应类型、时间规划等方面的经验可为本项目的顺利开展提供进一步的基础保障。并且能系统掌握柱层析纯化及核磁共振、高效液相色谱（HPLC）等分析技术。在预实验中成功合成4种N-苯基哌啶季铵盐衍生物（产率82%~91%），并通过MTT法筛选出化合物3a（IC50=97.64 μM），初步验证其抗胰腺癌活性。 
本研究依托济宁医学院药学院医药科研仪器平台拥有一批精密的仪器设备，有具备经验的研究人员维护，指导使用。主要的仪器设备有质谱、核磁共 振、高效液相色谱、扫描电镜和透射电镜等。科学仪器的良好运行，为科研开发 工作的顺利进行提供了基本条件。济宁医学院药学院具备以大型仪器为中心的技术保障系统， 科研器材采购供应系统和后勤保障系统。在化合物合成方面，科研仪器平台拥有实施有机合成研究所需的完善的设施设备。

经费预算

开支科目 预算经费（元） 主要用途 阶段下达经费计划（元）
前半阶段 后半阶段
预算经费总额 20000.00 无 12000.00 8000.00
1. 业务费 10000.00 无 6000.00 4000.00
（1）计算、分析、测试费 5000.00 无 2000.00 3000.00
（2）能源动力费 2000.00 无 2000.00 0.00
（3）会议、差旅费 0.00 无 0.00 0.00
（4）文献检索费 2000.00 无 1000.00 1000.00
（5）论文出版费 1000.00 无 1000.00 0.00
2. 仪器设备购置费 0.00 无 0.00 0.00
3. 实验装置试制费 5000.00 无 3000.00 2000.00
4. 材料费 5000.00 无 3000.00 2000.00
结束

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